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Développement d'un substrat permettant d'évaluer l'activité d'intégration de l'enzyme intégrase du VIH-1
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La synthèse d'inhibiteurs efficaces de l'intégrase du VIH-1, le virus du SIDA, nécessite un test d'activité performant pour identifier les meilleures molécules inhibitrices. La plupart des tests actuels mesurent seulement l'activité endonucléase de l'enzyme, alors que des inhibiteurs potentiels pourraient en principe bloquer l'activité enzymatique d'intégration. Un test permettant d'évaluer quantitativement l'activité d'intégration de l'enzyme serait donc d'une grande utilité mais il n'en existe aucun qui soit vraiment satisfaisant. Nous avons construit un substrat pour un tel test à partir du gène de sélection pour l'antibiotique zéocine (InVitrogen) modifié pour porter à ses deux extrémités une séquence nucléotidique reconnue par …

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Clonage du gène de la protéase du virus VIH-1 dans un plasmide d'expression eucaryote
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La protéase du VIH-1 constitue une importante cible pour le développement de nouveaux médicaments pour le traitement des sidéens. Cette enzyme assure la maturation des virions après l'étape de bourgeonnement à la fin du cycle de réplication. Dans le but d'une part, d'évaluer l'efficacité d'inhibiteurs potentiels de l'enzyme dans un système se rapprochant des conditions rencontrées in vivo et d'autre part, d'étudier la toxicité de la protéase dans la cellule, nous avons effectué le clonage du gène codant pour l'enzyme dans un plasmide d'expression eucaryote. Nous avons choisi le plasmide pMSG (Pharmacia) qui porte un promoteur inductible en amont du …

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Amplification et clonage du gène de la protéase du virus VIH-2 dans un vecteur d'expression bactérien
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Le VIH-2 représente une souche moins répandue du virus du SIDA, localisée principalement en Afrique de l'ouest. Nous travaillons actuellement à la mise au point d'inhibiteurs de la protéase du virus du SIDA et avons déjà quelques molécules actives contre l'enzyme du VIH-1, la souche plus courante dans la majorité des pays. Nous voulons éventuellement évaluer l'efficacité de nos inhibiteurs contre la protéase du VIH-2, étant donné que les deux protéases diffèrent au niveau de leur séquence nucléotidique et peptidique. Nous avons obtenu du NIH un phage recombinant portant une copie complète du provirus VIH-2 ROD, qui a servi de …

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Évaluation du taux d'insertion d'un substrat dans une cible plasmidique par l'intégrase du VIH-1, grâce à un nouveau test d'activité
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L'intégrase du virus du SIDA, le VIH, est une enzyme qui assure l'insertion du provirus dans l'ADN des cellules infectées de façon aléatoire. Cette enzyme possède deux activités distinctes principales, l'une de clivage du substrat et l'autre d'intégration du substrat dans une molécule cible d'ADN. Les tests utilisés actuellement pour étudier l'activité d'intégration de l'enzyme virale sont très limités en général et ne reflètent pas vraiment ce qui se produit avec le substrat naturel. Nous avons donc mis au point un nouveau test plus représentatif de cette activité. Dans ce test, un substrat constitué d'un gène de résistance à l'antibiotique …

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Infection persistante de cellules Véro initiée par le virus SV 40 en l'absence de particules défectives interférantes
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L'infection de cellules Véro (reins de singe) par le virus SV 40 conduit généralement à la réplication virale et à la lyse cellulaire. Dans certains cas cependant, de rares cellules survivent et donnent naissance à des lignées infectées de façon persistante. Dans le but d'évaluer l'importance des particules défectives interférantes (DI) dans ce type d'infection, nous avons transfecté des cellules Véro avec de faibles quantités d'ADN SV 40. Ces conditions permettent d'exercer un meilleur contrôle sur la présence de virus défectifs durant les premiers stades de l'infection. Nous avons obtenu une lignée de cellules (SVP-1) infectées de façon persistante par …

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Infection persistante de cellules Véro initiée par le virus SV 40 en l'absence de particules défectives interférantes
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L'infection de cellules Véro (reins de singe) par le virus SV 40 conduit généralement à la réplication virale et à la lyse cellulaire. Dans certains cas cependant, de rares cellules survivent et donnent naissance à des lignées infectées de façon persistante. Dans le but d'évaluer l'importance des particules défectives interférantes (DI) dans ce type d'infection, nous avons transfecté des cellules Véro avec de faibles quantités d'ADN SV 40. Ces conditions permettent d'exercer un meilleur contrôle sur la présence de virus défectifs durant les premiers stades de l'infection. Nous avons obtenu une lignée de cellules (SVP-1) infectées de façon persistante par …

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Infection persistante de cellules Véro initiée par le virus SV 40 en l'absence de particules défectives interférantes
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L'infection de cellules Véro (reins de singe) par le virus SV 40 conduit généralement à la réplication virale et à la lyse cellulaire. Dans certains cas cependant, de rares cellules survivent et donnent naissance à des lignées infectées de façon persistante. Dans le but d'évaluer l'importance des particules défectives interférantes (DI) dans ce type d'infection, nous avons transfecté des cellules Véro avec de faibles quantités d'ADN SV 40. Ces conditions permettent d'exercer un meilleur contrôle sur la présence de virus défectifs durant les premiers stades de l'infection. Nous avons obtenu une lignée de cellules (SVP-1) infectées de façon persistante par …

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