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Notre équipe a récemment cloné deux DNA complémentaires codant pour les protéines mPCI et mPC2. Ces deux protéines ont récemment été rapportées comme étant des enzymes capables de couper les prohormones polypeptidiques au pairs d'acides aminés basiques produisant ainsi des hormones biologiquement actives. Afin de caractériser davantage ces deux protéines, nous avons cloné les DNA dans le vecteur pJVN de L.I.'isolement des recombinants de baculovirus devrait alors nous permettre de produire une grande quantité de protéines pouvant atteindre des ng/l de milieu de culture. Nous avons pu purifier ces protéines par affinité à l'aide d'anticorps développés contre la forme recombinante …
À l'heure actuelle, un nombre important de techniques nous sont accessibles pour détecter la présence d'enzymes protéolytiques. Les plus couramment utilisées reposent sur l'emploi de courts substrats peptidiques auxquels est attaché un groupement chromogénique ou fluorogénique. Cependant, ces méthodes se révèlent souvent soit trop restrictives ou soit trop complexes et pas assez sensibles. Dans ce contexte, une méthode simple, rapide et sensible a été développée à partir de l'utilisation d'un substrat peptidique radiodé. Une extrémité est immobilisée de manière covalente par une de ses extrémités à une matrice insoluble et comporte à son autre extrémité un groupement radioactif. Deux substrats …