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Colloque
Le processus de régulation de volume après un choc hypotonique (RVD) s'effectue, dans les cellules MDCK, grâce à l'expulsion d'une certaine quantité d'osmolytes au milieu intracellulaire. Les osmolytes qui sont principalement impliqués dans la RVD sont les ions K+ et Cl- et certains acides aminés (aa) tels l'aspartate, le glutamate et la taurine. L'expulsion des ions s'effectue au moyen de l'activation de canaux potassiques sélectifs respectivement aux deux ions. Nous avons étudié la possible implication de l'un de ces canaux dans la sortie des acides aminés pendant la RVD. Nous avons utilisé le patch-clamp dans l'étude de la perméabilité du …
Colloque
La technique du "Single channel Patch-Clamp" a été employée dans l'étude de la régulation de volume sur les cellules épithéliales en culture MDCK, afin de déterminer les différentes conductances ioniques qui s'activent pendant ce processus. L'exposition des cellules à une solution hypotonique induit une augmentation du volume cellulaire. La réponse à cette dilatation est l'expulsion d'une quantité de soluté intracellulaire, ce qui ramène le volume vers des valeurs normales. Nos expériences montrent que jusqu'à 4 différents canaux peuvent être activés. En particulier nous avons mis en évidence l'activation d'un canal potassique de 27.4±3.3 pS (PNa/PK=.04). Ensuite nous nous sommes concentrés …
Colloque
La technique de "patch clamp" nous a permis de mettre en évidence la présence d'un canal potassique (PK/PNa = 17) à rectification anormale dont les conductances pour les courants entrants et sortants sont respectivement de 50 pS et 10 pS en condition symétrique de KCl (200 mM). Les courbes I-V obtenues pour différentes concentrations de KCl externe ont été interprétées en fonction d'un modèle à 2 barrières-1 site. Le calcium interne active le canal à des concentrations de 0.1 à 1 µM non pas en augmentant la durée moyenne des ouvertures mais surtout en augmentant le taux d'ouverture du canal; …
Colloque
On considère généralement que l'enzyme Na-K-ATPase est responsable du maintien des gradients ioniques et, par conséquent, du volume des cellules épithéliales. L'utilisation de la ouabaïne, inhibiteur spécifique de cette enzyme, devrait donc produire un gonflement cellulaire. Dans le cas des cellules en culture MDCK, on observe, en mesurant les contenus intracellulaires, une augmentation du sodium et du chlore et une perte de potassium et d'acides aminés. Par contre, on n'observe aucune augmentation du volume cellulaire (pour des cellules en suspension). Ceci s'explique par le fait que le gain en chlore n'est pas accompagné d'une augmentation du contenu total en anions. …
Colloque
Les membranes artificielles ont été fabriquées à partir de la technique de Mueller et Rudin (1969) et un antibiotique particulièrement intéressant, l'alaméthicine, y a été ajouté. Cet antibiotique a la propriété de changer les conductances ioniques de la membrane et ce changement est dépendant du potentiel appliqué sur la membrane. Il a été possible de mesurer le changement de conductance de la membrane en fonction du potentiel et du temps et par la suite de calculer les conductances mesurées à partir du modèle développé par Roy (1971).
