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Colloque
Dans le but de purifier et d'identifier la protéine transportrice responsable de la réabsorption rénale du phosphate, nous avons mis au point un protocole de reconstitution qui permet de mesurer son activité après chaque étape de la purification. Le transporteur reconstitué à partir du rein de bœuf possède les principales caractéristiques du transporteur natif dont une affinité semblable (40 μM) pour le phosphate. La captation de phosphate par les protéoliposomes est fortement stimulée (2000-300%) par la présence d'un gradient transmembranaire de sodium. La taille moléculaire du transporteur a été évaluée avec la technique d'inactivation par irradiation. Le transporteur bovin possède …
Colloque
Nous caractérisons un marqueur enzymatique spécifique au rein, qui pourrait complémenter l'étude échographique des pathologies rénales obstructives et néphrotiques. Le dosage différentiel des tréhalases (tréh.) intestinale et rénale du liquide amniotique (L.A.) permettrait un tel diagnostic. Premièrement nous avons déterminé leur solubilité respective dans le L.A. par filtration sur tamis moléculaire. L'activité tréhalasique a été évaluée en deux pics, le premier (volume mort) correspond à la tréh. membranaire (forme insoluble) alors que le deuxième (forme soluble) a une masse de 175 kD (tréh. soluble) correspondant à la valeur obtenue pour le rein de lapin. Deuxièmement par isoélectrofocalisation, la tréh. du …
Colloque
La réabsorption rénale du phosphate se fait principalement au niveau de la membrane à bordure en brosse du tubule contourné proximal. Récemment, il a été démontré que l'acide phosphonohformique (PFA) inhibe le transport de phosphate de façon compétitive sans qu'il ne soit lui-même transporté. De plus, l'inhibition est cellulaire dépendante du pH, de l'inhibition et elle aussi dépendante du gradient de sodium et semble spécifique à ce transporteur. L'inactivation aux radiations révèle une taille des protéines associées à l'activité transporteurs qui est nécessaire pour les purifier. Nous avons utilisé cette technique pour comparer la taille moléculaire des protéines de transport …
