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Colloque
La littérature scientifique a déjà décrit une perte majeure d'intégrité structurale et de contractilité pour les cardiomyocytes après une ischémie. Nous avons émis l'hypothèse que ces lésions cellulaires étaient dues à une altération des protéines cytosquelettiques. L'objectif fut donc d'étudier la distribution de deux protéines, la desmine (filaments intermédiaires) et la tubuline (microtubules) par microscopie électronique à transmission à haute amplification spécifique sur des cœurs ayant subi une ischémie de 15 minutes suivie d'une reperfusion de 20 minutes (perfusion de Krebs) avec et sans Ca2+. L'analyse des résultats démontre une perte de desmine dans la région subsarcolemmale au niveau des …
Colloque
La dystrophine est une protéine géante (M~ 427,000) qui est le produit du gène du locus de la dystrophie musculaire de type Duchenne (DMD) et Becker (BMD). On croit que cette protéine est associée au cytosquelette membranaire. Les objectifs de notre étude étaient: 1) de développer un essai immunologique rapide et quantitatif pour la dystrophine; 2) de déterminer si le contenu cellulaire en dystrophine varie selon le type de fibre musculaire. Des homogénats totaux de soleus (SOL: contraction lente, fibres de type I) et de vasteus superficiel latéral (SVL: contraction rapide, fibres de type II) ont été résolus par électrophorèse …
Colloque
Les changements ultrastructuraux observés dans les myocytes lors de l'ischémie cardiaque nous ont poussés à croire qu'un dérangement des protéines cytosquelettiques pouvait être à l'origine de la perte de contractilité. Par exemple, il est connu que l'arrangement cellulaire de la vinculine est perturbé par l'ischémie. À l'aide d'un appareil à perfusion de Langendorff, nous avons étudié l'effet de l'ischémie cardiaque ainsi que de la reperfusion avec et sans calcium sur la distribution de la desmine, constituant majeur des filaments intermédiaires ainsi que sur celle des desmoplakines, protéines principales des desmosomes. Les caractéristiques principales de ces tissus ischémiques étaient la perte …
Colloque
Les myofibrilles des cellules musculaires contiennent un système cytosquelettique élaboré, subdivisé en domaine endo- et exosarcomériques. Nous avons entrepris la caractérisation des protéines cytosquelettiques des myofibrilles isolées des muscles cardiaques, soleus (SOL) et vastus lateralis (VSL) du rat. Les myofibrilles sont soumises à des extractions successives dans les tampons à haute teneur en sel contenant du détergent. Les résidus cytosquelettiques sont solubilisés dans l'urée et soumis à l'analyse électrophorétique en gels SDS-polyacrylamide (de 7 à 15%). Les résultats se résument ainsi. Une protéine de haute Mr (B1: ~500 x 10^3 D) est très abondante dans les cytosquelettes (CSK) des trois …
Colloque
Les myofibrilles des cellules musculaires contiennent un système cytosquelettique élaboré, subdivisé en domaine endo- et exosarcomériques. Nous avons entrepris la caractérisation des protéines cytosquelettiques des myofibrilles isolées des muscles cardiaques, soleus (SOL) et vastus lateralis (VSL) du rat. Les myofibrilles sont soumises à des extractions successives dans les tampons à haute teneur en sel contenant du détergent. Les résidus cytosquelettiques sont solubilisés dans l'urée et soumis à l'analyse électrophorétique en gels SDS-polyacrylamide (de 7 à 15%). Les résultats se résument ainsi. Une protéine de haute Mr (B1: ~500 x 10^3 D) est très abondante dans les cytosquelettes (CSK) des trois …
Colloque
Les données sur l'organisation spatiale des microtubules (MTs) dans les muscles squelettiques proviennent d'observations en microscope électronique avec des sections enrobées dans du plastique. Un des problèmes inhérents à cette approche est la difficulté d'identifier les MTs au travers des myofibrilles contractées. Notre objectif était de déterminer l'organisation spatiale des MTs dans les fibres musculaires de rat adulte à l'aide de la technique d'immunofluorescence en microscopie optique. Les muscles vastus lateralis superficiel (SVL) et soleus (SOL) ont été fixés et enrobés dans le polyéthylène glycol. Des sections (1-2 µm) ont été incubées avec un anticorps monoclonal (DM 1A) spécifique à …
Colloque
IFAPA-400 est une protéine cytosquelettique de très haut poids moléculaire exprimée spécifiquement dans les tissus myogéniques et neurogéniques de l'embryon de poulet. Utilisant l'anticorps monoclonal F51H2, nous avons observé sa disparition progressive des cellules musculaires et nerveuses dès les premières manifestations de cytodifférenciation terminale. Ce patron d'expression n'est cependant pas absolu puisque nous avons récemment mis IFAPA-400 en évidence dans les cellules musculaires lisses de l'aorte chez l'adulte. Par immunodétection sur des segments congénitaux de l'aorte adulte, nous avons réalisé qu'IFAPA-400 est exprimée très fortement dans les cellules musculaires lisses de l'aorte à sa sortie du cœur et que son …
Colloque
Les myofibrilles des cellules musculaires contiennent un système cytosquelettique élaboré, subdivisé en domaine endo- et exosarcomériques. Nous avons entrepris la caractérisation des protéines cytosquelettiques des myofibrilles isolées des muscles cardiaques, soleus (SOL) et vastus lateralis (VSL) du rat. Les myofibrilles sont soumises à des extractions successives dans les tampons à haute teneur en sel contenant du détergent. Les résidus cytosquelettiques sont solubilisés dans l'urée et soumis à l'analyse électrophorétique en gels SDS-polyacrylamide (de 7 à 15%). Les résultats se résument ainsi. Une protéine de haute Mr (B1: ~500 x 10^3 D) est très abondante dans les cytosquelettes (CSK) des trois …
Colloque
La tubuline est une protéine ubiquiste des tissus animaux et un constituant majeur du tissu nerveux. En microscopie électronique, la présence de microtubules formés des sous-unités α, β-tubuline a été démontrée au niveau du muscle squelettique. Toutefois, l'obtention de données quantitatives est basée que sur le dénombrement des structures microtubulaires. Les objets de cette étude étaient la mise au point d'une méthode immunochimique permettant de quantifier la sous-unité α de la tubuline (α-TUB) du muscle squelettique pour ensuite comparer les niveaux d'α-TUB retrouvés dans les fibres musculaires lentes et rapides. Les muscles soleus (SOL-lent) et vaste latéral superficiel (VLS-rapide) de …
Colloque
Chez les invertébrés, le cytosquelette contient des protéines possédant des caractéristiques biochimiques et immunologiques semblables à celles décrites pour les protéines de filaments intermédiaires. L'identification d'une de ces protéines chez les oeufs d'oursin a été faite par immunodétection avec l'anticorps universel Anti-IF monoclonal produit par Pruss et al., (Cell 27: 419,1981). L'immunomarquage de l'insulaire du pronucleus femelle concorde avec les observations rapportées dans le cas des cellules somatiques. Durant la première mitose de l'oeuf, un marquage prédominant est détecté au niveau de l'appareil mitotique, plus spécifiquement entre les chromosomes et sur l'aster. Le marquage est localisé au niveau du développement, …
