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Communication
Pseudomonas aeruginosa (PA) est un pathogène opportuniste causant des infections secondaires chez les personnes atteintes de mucoviscidose. La mutagénèse avec étiquettes d’ADN uniques ("PCR-based signature tagged mutagenesis" (PBSTM)) permet d’identifier des gènes essentiels à l’initiation et/ou au maintient de l’infection. Dans cette méthode, l’identification de gènes essentiels in vivo se fait par sélection phénotypique négative. La PBSTM originale utilise 12 mini-Tn5s pour construire 12 banques de mutants avec étiquettes. Ces mutants peuvent être criblés par groupe de 12. En utilisant la PBSTM, nous avons criblé 1 056 mutants de PA et identifié 13 mutants atténués. Le niveau d’atténuation de ces …
Communication
Les gènes Mur responsables des étapes cytoplasmiques de la biosynthèse du peptidoglycan sont tous des gènes essentiels et des cibles thérapeutiques potentielles. Cependant, il n’existe aucun antibiotique utilisé en clinique qui interfère avec les enzymes Mur. Les gènes murA-F ont été sousclonés dans le vecteur pET. MurA-F ont été surexprimées dans E. coli. Les protéines ont été purifiées via leur étiquette 6X His en C-terminale par une seule étape de chromatographie sur une colonne d’affinité chargée au Ni2+. Deux banques de phages M13 ont été criblées contre MurC. Ces banques expriment 3-4 x 10^9 séquences peptidiques aléatoires fusionnées à la …
