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Colloque
Le sporozoaire Toxoplasma gondii, parasite intracellulaire obligatoire infectant l'humain, est un modèle important de biologie moléculaire à cause d'un cycle de vie complexe sexué et asexué. À partir d'une banque génomique dans λZ001, l'ADNr de T. gondii a été isolé dans un fragment Sau3A de 10,0kb. La caractérisation de l'unité transcriptionnelle d'ADNr de 9,0kb (18S-5,8S-28S) contenant un intron dans l'ITS1 a été faite par la méthode enzymatique, à l'aide d'amorces universelles. Les comparaisons des séquences 18S et l'analyse phylogénétique par différentes méthodes statistiques de parcimonie et d'alignement multiples révèlent que T. gondii semble appartenir au dinoflagellé Prorocentrum micans.
Colloque
Le gène bla OXA-3 responsable de l'hydrolyse des pénicillines isoxazolyles a été isolé à partir du transposon Tn1417 de Pseudomonas aeruginosa, codant pour la résistance aux aminopénicillines, β-lactamine, chloramphénicol, mercure et sulfamides. Un fragment BamHI-BamHI de 5.3 Kb a été cloné dans pBCG131, puis cartographié avec des endonucléases de restriction. Des sous-clonages dans pBCG1+ et pBCG131 ont localisé le gène bla dans une région de 1.3 Kb. Le séquençage a été réalisé selon la méthode enzymatique. L'analyse de la séquence révèle un cadre de lecture ouvert de 825 pb, codant pour une protéine de 275 acides aminés. L'analyse par ordinateur …
Colloque
Chez les eucaryotes, il y a 2 ARN polymérases qui transcrivent l'ADNr, l'ARN polymérase I transcrit l'unité 18S-5,8S-28S et l'ARN polymérase III transcrit l'ARN5S. Un clone recombinant λZ001 contenant l'unité d'ADNr de T. gondii a été cartographié et séquencé. Par des hybridomes de type Northern et Southern, les sous-unités majeures de l'ADNr furent situées dans un fragment de 9,0 kb. Les unités se retrouvent en tandem tête-à-queue dans l'ordre 18S-5,8S-28S comme chez les eucaryotes. L'ADNr 5S de T. gondii localisé et caractérisé, situation unique chez les eucaryotes, à l'exception de Saccharomyces cerevisiae. Par contre, la direction de transcription du gène …
Colloque
Toxoplasma gondii est un parasite ubiquitaire qui infecte les humains et plusieurs animaux. L'étude de l'opéron de l'ADNr de T. gondii fut initiée par la construction d'une banque génomique de T. gondii souche Nicole dans le phage λ2001. Un clone λ2001 ayant un insert Sau 3a de 10 kb fut isolé avec des sondes d'ADNr de X. leavis. Des fragments de restriction EcoRI-HindIII, HindIII-PstI et HindIII-HindIII <1,5 kb furent sous-clonés dans M13mpl8 et 19. Les résultats préliminaires du séquençage par la méthode des didéoxynucléotides et des comparaisons par ordinateur nous confirment la présence et l'emplacement des ADN 18s et 5s. …
Colloque
Dans notre laboratoire, nous avons cloné 27 gènes ß-lactamases dans le but de les utiliser comme modèle d'étude pour: 1) l'évolution de la résistance aux ß-lactamines et 2) explorer le polymorphisme des gènes bla. Dans cette optique, les gènes bla CARB-3 et OXA-5 ont été clonés dans le vecteur plasmidique pACY184 et cartographiés à l'aide de d'endonucléases de restriction. La construction de plasmides de délétion a permis de localiser les gènes structuraux et la détermination des points isoélectriques a confirmé des enzymes protéiques. Une étude des acides nucléiques par hybridation à l'aide de sondes d'ADN intragénique ont permis des homologies …
Colloque
L'utilisation des bêta-lactamines a contribué à augmenter la prévalence de la résistance chez les bactéries gram-négatives par les bêta-lactamases plasmidiques. Le gène de la bêta-lactamase plasmidique LCR-1 codé par le transposon multirésistant Tn1412 a été localisé à l'intérieur d'un fragment BamH1 de 4.2 Kb cloné dans le vecteur pACYC184 et cartographié. Suite à la délétion de 1.7 fragments AvaI, le fragment BamH1 de 1.7 kb a été cloné dans les phages M13 mp18 et mp19 et séquencé. Le gène de 803 codons pour une protéine de 260 acides aminés ayant un site actif STFK et des domaines STK1, est entre …
Colloque
La diversité des ß-lactamases à médiation plasmidique capables d'hydrolyser les pénicillines et les céphalosporines est remarquable. Afin de comprendre l'évolution et le polymorphisme des 30 gènes bla connus, une analyse moléculaire s'impose. Le gène bla SHV-1 a été isolé d'un fragment de restriction BamH1 de 8 kb provenant du plasmide R974 cloné dans le vecteur pACY184. Suite à une cartographie physique et chimique et à la délétion de fragments d'ADN, le gène structural a été localisé dans 3 fragments contigus PvuII de 159, 347 et 637 pb. Ces fragments ont été cloné dans M13mp18/19 et les 2 brins d'ADN séquencé …
Colloque
Toxoplasma gondii est un sporozoaire responsable d'infections chez l'humain et chez plusieurs espèces animales. Une banque génomique de T. gondii a été construite dans le vecteur phagique lambda 2001. À partir de T. gondii cultivé sur cellules Vero et purifié par gradient de densité, l'ADN chromosomique de T. gondii a été partiellement coupé avec l'endonucléase de restriction Sau3A et les fragments entre 10 kb et 25 kb ont été prélevés. Le vecteur λ2001 a été coupé avec les endonucléases BamHI et EcoRI, lié aux fragments d'ADN de Toxoplasme à l'aide de la T4 DNA ligase, et encapsidé in vitro. La …
Colloque
Nous postulons que la genèse de novo de transposons multirésistants chez les bactéries Gram négatif implique l'existence d'une région spécifique permettant l'acquisition de gènes de résistance. Par clonage directionnel dans le plasmide pACY184, nous avons isolé un fragment cryptique d'ADN BamHI-NruI de 1,45 kb adjacent au gène ß-lactamase OXA-2. La carte physique détaillée du plasmide recombinant pMON23 a été construite en utilisant 10 enzymes de restriction. Une homologie structurale entre les fragments d'ADN adjacents à 16 gènes ß-lactamases différentes a été confirmée par hybridation moléculaire en utilisant les fragments d'ADN BamHI-AvaI (600 bp) et AvaI-EcoRI (650 bp) de pMON23 comme …
Colloque
Nous postulons que la genèse de novo de transposons multirésistants chez les bactéries Gram négatif implique l'existence d'une région spécifique permettant l'acquisition de gènes de résistance. Par clonage directionnel dans le plasmide pACY184, nous avons isolé un fragment cryptique d'ADN BamHI-NruI de 1,45 kb adjacent au gène ß-lactamase OXA-2. La carte physique détaillée du plasmide recombinant pMON23 a été construite en utilisant 10 enzymes de restriction. Une homologie structurale entre les fragments d'ADN adjacents à 16 gènes ß-lactamases différentes a été confirmée par hybridation moléculaire en utilisant les fragments d'ADN BamHI-AvaI (600 bp) et AvaI-EcoRI (650 bp) de pMON23 comme …
