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Communication
Pseudomonas aeruginosa est une bactérie opportuniste et ubiquitaire possédant une résistance élevée aux antibiotiques. La STM (signature-tagged mutagenesis) est une méthode qui a été développée afin d’identifier les gènes responsables de la virulence d’une bactérie. À l’aide de cette technique, 148 gènes ont été reconnus comme étant essentiels au maintien de l’infection de P. aeruginosa chez le rat. Nous avons choisi de nous intéresser au gène, essentiel in vivo, PA3826 produisant une protéine membranaire de fonction inconnue de 165 acides aminés et convenant aux études de RMN solide. Nous avons tout d’abord synthétisé des amorces spécifiques au gène PA3826 contenant …
Communication
Pseudomonas aeruginosa (PA) est un pathogène opportuniste causant des infections secondaires chez les personnes atteintes de mucoviscidose. La mutagénèse avec étiquettes d’ADN uniques ("PCR-based signature tagged mutagenesis" (PBSTM)) permet d’identifier des gènes essentiels à l’initiation et/ou au maintient de l’infection. Dans cette méthode, l’identification de gènes essentiels in vivo se fait par sélection phénotypique négative. La PBSTM originale utilise 12 mini-Tn5s pour construire 12 banques de mutants avec étiquettes. Ces mutants peuvent être criblés par groupe de 12. En utilisant la PBSTM, nous avons criblé 1 056 mutants de PA et identifié 13 mutants atténués. Le niveau d’atténuation de ces …
Communication
Les gènes Mur responsables des étapes cytoplasmiques de la biosynthèse du peptidoglycan sont tous des gènes essentiels et des cibles thérapeutiques potentielles. Cependant, il n’existe aucun antibiotique utilisé en clinique qui interfère avec les enzymes Mur. Les gènes murA-F ont été sousclonés dans le vecteur pET. MurA-F ont été surexprimées dans E. coli. Les protéines ont été purifiées via leur étiquette 6X His en C-terminale par une seule étape de chromatographie sur une colonne d’affinité chargée au Ni2+. Deux banques de phages M13 ont été criblées contre MurC. Ces banques expriment 3-4 x 10^9 séquences peptidiques aléatoires fusionnées à la …
Colloque
À l'aide des techniques du génie génétique, nous avons débuté une analyse moléculaire détaillée de dix transposons B-lactamases complexes. Les cartes physiques d'ADN de ces éléments génétiques mobiles ont été construites à l'aide des endonucléases de restriction BamHI, BglII, EcoRI, HindIII, et SstI et comparées à des transposons connus tels que Tn3, Tn4, Tn21 et Tn263. Les gènes B-lactamases ont été isolés par le clonage moléculaire dans le plasmide pACYC184 et localisés sur les cartes physiques des transposons étudiés. L'homologie structurale des gènes transposases-résolvases a été évaluée par hybridation avec des acides nucléiques en utilisant des fragments d'ADN spécifiques aux …
Colloque
À l'aide des techniques du génie génétique, nous avons débuté une analyse moléculaire détaillée de dix transposons B-lactamases complexes. Les cartes physiques d'ADN de ces éléments génétiques mobiles ont été construites à l'aide des endonucléases de restriction BamHI, BglII, EcoRI, HindIII, et SstI et comparées à des transposons connus tels que Tn3, Tn4, Tn21 et Tn263. Les gènes B-lactamases ont été isolés par le clonage moléculaire dans le plasmide pACYC184 et localisés sur les cartes physiques des transposons étudiés. L'homologie structurale des gènes transposases-résolvases a été évaluée par hybridation avec des acides nucléiques en utilisant des fragments d'ADN spécifiques aux …
Colloque
Chez les bactéries Gram-négatives, il existe actuellement plus de vingt B-Lactamases plasmidiques différentes impliquées dans la résistance aux pénicillines et aux céphalosporines. À l'aide de plasmides conjugatifs (pUZ8 et pUB5573) et par l'amplification de l'expression des gènes B-lactamases dans des plasmides à copies multiples (pMK20 et pCR1), nous démontrons que vingt des B-lactamases plasmidiques connues font parties d'éléments génétiques mobiles. En plus de la résistance aux B-lactamases, nous avons trouvé des transposons isolés ont des gènes de résistance au chloramphénicol, à la gentamicine, à la kanamycine, au mercure, à la streptomycine, au sulfonamide, à la tobramycine et au triméthoprime. En …
