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A l'aide d'une technique de clonage sélective, nous avons isolé un clone contenant des séquences génomiques correspondant à un orphon ribosomique. Parmi ces séquences, on retrouve celle du promoteur de la polymérase I et des amplificateurs (enhancers). Ces mêmes séquences furent retrouvées par analyse de Southern dans le génome de trois grenouilles différentes et sous une forme modifiée, dans des cellules en culture. Par analyse d'électrophorèse à champs pulsés, nous avons montré que notre fragment migrait différemment du locus ribosomique par conséquent qu'il n'y était pas physiquement associé. Nous concluons donc cet orphon est le résultat d'un événement de translocation/recombinaison.
Le gène du précurseur 40S de l'ARNr chez X. laevis est une répétition en tandem d'environ 400 unités séparées par une région intergénique impliquée dans le contrôle de la transcription du gène. Ce contrôle implique donc plusieurs séquences d'ADN et plusieurs protéines. L'interaction entre ces deux éléments a déjà fait l'objet d'études par protection à la DNaseI in vitro, et on a pu définir des régions protégées par des facteurs de transcription purifiés. Nous avons ici utilisé la technique d'amplification linéaire de séquences par la polymérase Taq (PCR linéaire) pour permettre ces études in vivo, en effectuant des expériences de …
Des études de microinjection ont montré l'importance, in vivo de certains nucléotides à l'intérieur du promoteur (CORE et UCE) des gènes ribosomiques de Xénopus laevis. Nous avons comparé ces résultats avec ceux obtenus par transcription in vitro dans des extraits protéiques nucléaires de cellules de Xénopus laevis en culture et avec les sites de liaison du facteur de transcription xUBF par empreintes à la 'DNase I (footprint). Dans 2 cas particuliers, par exemple, le taux de transcription in vitro des promoteurs mutés à -33 et à -7 a drastiquement diminué à respectivement 10% et 2% du taux obtenu avec le …