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Colloque
L'ensemble du système nerveux est dérivé du neuroectoderme (NE). Lors de la neurulation, le NE se réorganise afin de former le tube neural. La morphogenèse du tube neural et la différenciation subséquente des cellules du NE en une variété de cellules neurales impliquent l'expression temporelle et spatiale de gènes particuliers. Afin d'étudier les mécanismes gouvernant l'expression génique différentielle dans le NE lors de la neurulation, nous avons isolé des marqueurs moléculaires de gènes NE dont l'expression est régulée au cours du développement. Nous avons généré une banque d'une sonde d'ADNc enrichis pour des gènes exprimés spécifiquement dans le NE d'embryons …
Colloque
Les métallothionéines (MTs) sont des protéines riches en cystéines qui lient les ions métalliques tels que le Cd2+, le Zn2+ et le Cu2+. Leur biosynthèse est induite par ces métaux et elles seraient impliquées dans l'homéostasie des métaux lourds essentiels. Deux isoformes de la protéine sont présentes chez les mammifères mais une seule est détectée chez la plupart des autres vertébrés. Nous avons cloné et séquencé un ADNc codant pour la MT chez Xenopus laevis. Cet ADNc (xMT) a 730 pb et contient un cadre de lecture unique codant pour une protéine de 62 acides aminés dont 20 cystéines. La …
Colloque
Les métallothionéines (MTs) sont de petites protéines riches en résidus cystéine capables de lier les ions métalliques. La biosynthèse des MTs est contrôlée au niveau transcriptionnel par différents stimuli tels les métaux lourds, les hormones et les interleukines. Le processus d'induction par les métaux lourds est dépendant de la présence de courtes séquences nucléotidiques (MREs) situées en amont des gènes. Des facteurs de régulation interagissant avec ces MREs. Des expériences d'irradiation aux rayons UV et de retardement sur gel démontrent que les facteurs nucléaires MEP-1 et MBF-1 sont différents, notamment par le poids moléculaire. De plus, au moyen de la …
Colloque
Les métallothionéines (MTs) sont des petites protéines qui lient les métaux lourds. Elles existent chez plusieurs organismes, de la levure aux primates, et leur biosynthèse est inductible par les métaux qu'elles lient. Nous avons entrepris le clonage des gènes à MTs chez les amphibiens. Nous avons obtenu par réaction en chaîne avec la polymérase (PCR) des fragments de 180 et 200 pbs d'ADN complémentaires (ADNc) de MT d'amphibiens X. laevis et A. mexicanum (axolotl). Les réactions PCR ont été faites avec des oligodésoxynucléotides dégénérés correspondant à une région des MTs très fortement conservée entre les espèces et de l'ADN préparé …
Colloque
Les métallothionéines (MTs) sont de petites protéines capables de lier les métaux lourds et dont la biosynthèse est induite par les métaux que la protéine lie. Cette induction s'effectue au niveau transcriptionnel et implique de courtes séquences d'ADN (MREs) situées en amont des gènes, de même que des facteurs de régulation interagissant avec ces MREs. Au moyen d'une procédure de transfert protéique et d'expériences d'irradiation aux rayons UV, nous avons mis en évidence une protéine nucléaire de poids de 108 kDa, MEP-1, capable de lier avec différents degrés d'affinité les MREs des gènes des MTs. Cette protéine n'est pas glycosylée …
Colloque
Les métallothionéines (MTs) sont de petites protéines qui lient les métaux lourds tels que le cadmium, le zinc et le cuivre et dont les gènes sont inductibles par les mêmes métaux que la protéine lie. L'activation par les métaux lourds du gène de la MT de souris est assurée par cinq éléments de régulation, MREs, situés dans le promoteur du gène et sur lesquels se lieraient des facteurs cellulaires. Au moyen d'un test de protection contre l'exonucléase III, nous montrons que tous les MREs du gène de la MT-I de souris de même que les éléments MRE-4 du gène MT-II …
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La molécule d'adhésion des cellules neurales, N-CAM, est une glycoprotéine de surface exprimée très tôt dans la neuroectoderme (NE) lors de la morphogenèse neurale. Chez le poulet et la souris, N-CAM est exprimée dans les cellules neurales et musculaires, alors que chez l'amphibien Xenopus laevis (anoure), l'expression des ARN messagers de N-CAM est strictement limitée au NE. En vue d'étudier l'expression génique de N-CAM dans le NE nous avons cloné l'ADN complémentaire (ADNc) de N-CAM chez Ambystoma mexicanum (urodèle). Une génothèque contenant 2.5 x 10⁶ clones indépendants a été construite dans le vecteur λgt11 avec de l'ARN poly[A] provenant d'embryons …
Colloque
Le promoteur du gène de la métallothionéine I de souris contient six éléments de régulation par les métaux lourds (MRE) qui seraient le site de liaison de protéine(s) nucléaires intervenant la régulation de l'expression du gène. Nous avons identifié une protéine de poids moléculaire apparent de 108 Kd (p108) liant l'élément MREd. Un extrait de protéine nucléaires brut de cellules L a été appliqué sur une colonne de filtration sur gel (G-200). La protéine p108 se comporte comme un facteur de haut poids moléculaire (> 200 Kd) et élué avec les fractions correspondant aux molécules exclues du gel. L'essai d'un …
Colloque
L'involution, au cours de la gastrulation du chordomesoderme conduit à la différenciation de l'ectoderme indifférencié en ectoderme neural ou neuroépithélium. Le développement du neuroépithélium en un tube, le tube neural, implique l'expression temporelle et spatiale d'une série de gènes spécifiques. En vue d'identifier et caractériser ces gènes, nous avons construit une génothèque d'ADN complémentaire (ADNc) correspondant aux messagers exprimés chez des neurulas (stade 16) d'Ambystoma mexicanum (axolotl). Nous avons isolé l'ARN total par la méthode du LiCl qui donnait un ARN d'excellente qualité et très bon rendement. L'ARN poly(A)+ a été purifié avec une colonne d'Oligo(dT) puis utilisé pour synthétiser …
Colloque
Le promoteur du gène de la métallothionéine I (MTI) de souris est activé par certains agents dont les métaux lourds tels le cadmium et le zinc. L'activation du gène par les métaux lourds est assurée par des séquences d'ADN spécifique, les éléments de régulation par les métaux ou MRE. Le promoteur du gène de la MTI de souris contient six de ces éléments. Nous avons isolé l'élément MREd et l'avons fait porter pour l'induction par les métaux. L'action des métaux lourds sur la liaison de protéines nucléaires au niveau de MREd a été étudiée par un test de protection contre …
