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Colloque
La diversité des β-lactamases plasmidiques capables d'hydrolyser les pénicillines et céphalosporines est remarquable chez les bactéries gram-négatives. Par clonage moléculaire, nous avons isolé 30 gènes bla et développé des sondes oligonucleotides couvrant des fragments d'ADN. Chaque fragment contenant bla a été cloné, fragmenté par sous-clonage et séquencé par la méthode didéoxy. L'analyse par ordinateur de ces séquences nous a permis de déterminer des régions hautement conservées. À partir de ces données, nous avons produit des oligonucleotides comme sondes et démontré leur spécificité par hybridation. La technologie du PCR a confirmé la spécificité de ces sondes bla tandis que des combinaisons …
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La diversité des β-lactamases plasmidiques capables d'hydrolyser les pénicillines et céphalosporines est remarquable chez les bactéries gram-négatives. Par clonage moléculaire, nous avons isolé 30 gènes bla et développé des sondes oligonucleotides couvrant des fragments d'ADN. Chaque fragment contenant bla a été cloné, fragmenté par sous-clonage et séquencé par la méthode didéoxy. L'analyse par ordinateur de ces séquences nous a permis de déterminer des régions hautement conservées. À partir de ces données, nous avons produit des oligonucleotides comme sondes et démontré leur spécificité par hybridation. La technologie du PCR a confirmé la spécificité de ces sondes bla tandis que des combinaisons …
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La diversité des β-lactamases plasmidiques capables d'hydrolyser les pénicillines et céphalosporines est remarquable chez les bactéries gram-négatives. Par clonage moléculaire, nous avons isolé 30 gènes bla et développé des sondes oligonucleotides couvrant des fragments d'ADN. Chaque fragment contenant bla a été cloné, fragmenté par sous-clonage et séquencé par la méthode didéoxy. L'analyse par ordinateur de ces séquences nous a permis de déterminer des régions hautement conservées. À partir de ces données, nous avons produit des oligonucleotides comme sondes et démontré leur spécificité par hybridation. La technologie du PCR a confirmé la spécificité de ces sondes bla tandis que des combinaisons …
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La diversité des β-lactamases plasmidiques capables d'hydrolyser les pénicillines et céphalosporines est remarquable chez les bactéries gram-négatives. Par clonage moléculaire, nous avons isolé 30 gènes bla et développé des sondes oligonucleotides couvrant des fragments d'ADN. Chaque fragment contenant bla a été cloné, fragmenté par sous-clonage et séquencé par la méthode didéoxy. L'analyse par ordinateur de ces séquences nous a permis de déterminer des régions hautement conservées. À partir de ces données, nous avons produit des oligonucleotides comme sondes et démontré leur spécificité par hybridation. La technologie du PCR a confirmé la spécificité de ces sondes bla tandis que des combinaisons …
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La diversité des β-lactamases plasmidiques capables d'hydrolyser les pénicillines et céphalosporines est remarquable chez les bactéries gram-négatives. Par clonage moléculaire, nous avons isolé 30 gènes bla et développé des sondes oligonucleotides couvrant des fragments d'ADN. Chaque fragment contenant bla a été cloné, fragmenté par sous-clonage et séquencé par la méthode didéoxy. L'analyse par ordinateur de ces séquences nous a permis de déterminer des régions hautement conservées. À partir de ces données, nous avons produit des oligonucleotides comme sondes et démontré leur spécificité par hybridation. La technologie du PCR a confirmé la spécificité de ces sondes bla tandis que des combinaisons …
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La diversité des β-lactamases plasmidiques capables d'hydrolyser les pénicillines et céphalosporines est remarquable chez les bactéries gram-négatives. Par clonage moléculaire, nous avons isolé 30 gènes bla et développé des sondes oligonucleotides couvrant des fragments d'ADN. Chaque fragment contenant bla a été cloné, fragmenté par sous-clonage et séquencé par la méthode didéoxy. L'analyse par ordinateur de ces séquences nous a permis de déterminer des régions hautement conservées. À partir de ces données, nous avons produit des oligonucleotides comme sondes et démontré leur spécificité par hybridation. La technologie du PCR a confirmé la spécificité de ces sondes bla tandis que des combinaisons …
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La diversité des β-lactamases plasmidiques capables d'hydrolyser les pénicillines et céphalosporines est remarquable chez les bactéries gram-négatives. Par clonage moléculaire, nous avons isolé 30 gènes bla et développé des sondes oligonucleotides couvrant des fragments d'ADN. Chaque fragment contenant bla a été cloné, fragmenté par sous-clonage et séquencé par la méthode didéoxy. L'analyse par ordinateur de ces séquences nous a permis de déterminer des régions hautement conservées. À partir de ces données, nous avons produit des oligonucleotides comme sondes et démontré leur spécificité par hybridation. La technologie du PCR a confirmé la spécificité de ces sondes bla tandis que des combinaisons …
Colloque
La diversité des ß-lactamases à médiation plasmidique capables d'hydrolyser les pénicillines et les céphalosporines est remarquable. Afin de comprendre l'évolution et le polymorphisme des 30 gènes bla connus, une analyse moléculaire s'impose. Le gène bla SHV-1 a été isolé d'un fragment de restriction BamH1 de 8 kb provenant du plasmide R974 cloné dans le vecteur pACY184. Suite à une cartographie physique et chimique et à la délétion de fragments d'ADN, le gène structural a été localisé dans 3 fragments contigus PvuII de 159, 347 et 637 pb. Ces fragments ont été cloné dans M13mp18/19 et les 2 brins d'ADN séquencé …
Colloque
Nous postulons que la genèse de novo de transposons multirésistants chez les bactéries Gram négatif implique l'existence d'une région spécifique permettant l'acquisition de gènes de résistance. Par clonage directionnel dans le plasmide pACY184, nous avons isolé un fragment cryptique d'ADN BamHI-NruI de 1,45 kb adjacent au gène ß-lactamase OXA-2. La carte physique détaillée du plasmide recombinant pMON23 a été construite en utilisant 10 enzymes de restriction. Une homologie structurale entre les fragments d'ADN adjacents à 16 gènes ß-lactamases différentes a été confirmée par hybridation moléculaire en utilisant les fragments d'ADN BamHI-AvaI (600 bp) et AvaI-EcoRI (650 bp) de pMON23 comme …
Colloque
Chez les bactéries à gram-négatif, l'électrofocalisation comparative permet de distinguer plus de 26 β-lactamases différentes codées par des plasmides. Comme alternative à cette méthode, nous avons construit des sondes d'ADN synthétiques. Le clonage moléculaire et l'édition de fragments d'ADN nous ont permis de localiser les gènes β-lactamases CARB-4, PSE-4 et SHV-1. Des fragments d'ADN interne aux gènes structuraux ont été séquencés selon la méthode de didéoxy. À partir de nos résultats et des séquences d'ADN connues TEM-1 et OXA-2, nous y avons synthétisé une série de sondes oligonucléotidiques par la chimie des phosphotriesters. La spécificité de chaque sonde a été …
