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Colloque
Le gène déterminant la synthèse de la GH chez le rat n'est exprimé que par certaines cellules provenant du lobe antérieur de l'hypophyse. Il a été démontré que cette répression tissu-spécifique est causée par l'absence du facteur de transcription Pit-1 et par la présence d'une protéine nucléaire (SBP1) se liant à 2 séquences régulatrices essentielles à la répression de la GH et désignées Silencer-1 et 2. Nous avons démontré que SBP1 interagit avec une séquence identique à celle reconnue par l'activateur transcriptionnel NF1-L. L'indice moléculaire de 30 KDa, identifié pour SBP1 par pompage aux UV, suggère que SBP1 pourrait correspondre …
Colloque
Le gène p12 chez la souris détermine la production d'un inhibiteur de protéase dont l'expression androgéno-dépendante s'avère restreinte à la prostate, aux vésicules séminales et aux glandes coagulantes. Une étude moléculaire récente nous a permis d'identifier plus de 15 protéines nucléaires trans-agissant interagissant avec la région promotrice 5'-régulatrice de ce gène. Nous avons démontré que l'une de celles-ci interagit avec une séquence cis-active (p12.1) localisée à l'intérieur de la région promotrice (position -456 à -261) entre les boîtes TATA et CCAAT. Une analyse détaillée de la région protéique par délétion, que nous avons réalisée, a permis d'identifier 5 protéines nucléaires …
Colloque
On ne peut trouver dans la littérature, de procédures nous permettant de préparer dans une période de temps raisonnable des extraits nucléaires provenant de tissus animaux. L'unique méthode efficace consiste à séparer par ultracentrifugation les noyaux sur coussins de sucrose. Cependant, cette procédure est longue et fastidieuse et comporte des étapes de purification coûteuses. De plus, une telle procédure n'est pas appropriée pour la préparation d'échantillons à partir de tissus non abondants tel que les surrénales ou la prostate. Nous décrivons ici, une nouvelle micro-méthode simple et efficace pour préparer rapidement des extraits nucléaires provenant de tissus animaux ou de …
Colloque
Le gène pl2 détermine la production d'un inhibiteur de protéases exprimé principalement dans la prostate ventrale, les glandes coagulantes et les vésicules séminales. Afin d'identifier les séquences d'ADN nécessaires pour conférer l'expression tissu-spécifique de pl2, nous nous sommes intéressés aux facteurs trans-actifs interagissant avec les séquences du promoteur de ce gène. Localisé en position -25, entre les séquences de la boîte TATA et de la boîte CAAT, nous avons identifié un site d'attachement désigné pl2.1 pour un facteur de transcription que nous avons nommé PIF (protease inhibitor factor 1) et produit par plusieurs lignées cellulaires d'origines diverses. La protection obtenue …
Colloque
La régulation tissu-spécifique de l'expression du gène de la GH chez le rat (rGH) résulte de l'attachement d'une variété de facteurs trans-actifs à des séquences cis-actives distinctes localisées soit dans le promoteur ou dans la région 5' régulatrice de ce gène. Nous avons identifié deux régions silencieuses de 25bp impliquées dans la régulation tissu-spécifique du gène rGH dans les cellules d'origine non-hypophysaire. Ces séquences, désignées Sil-1 et -2, sont situées 305 et 520pb en amont du site d'initiation de la transcription. Une analyse de la région Sil-1 par cartographie à la DnaseI et au DMS a démontré que cette région …
Colloque
La poly(ADP-ribose) polymérase (PARP) est une enzyme de 113 kDa qui catalyse la synthèse d'homopolymères d'unités ADP-ribose sur diverses protéines nucléaires. Le gène de la PARP chez l'humain et le xénope est situé sur le chromosome 1 et comprend 23 exons. Un fragment d'ADN contenant les 4 premiers exons du gène chez le rat et 5 kb de la région promotrice a été séquencé, et son cDNA isolé. L'analyse de la région promotrice révèle une région de 16 bp (US-1) hautement conservée dans plusieurs gènes "housekeeping", y compris le PARP chez l'humain et l'ADN polymérase β chez l'humain, le rat …
Colloque
Le produit du gène p12 (souris) est une glycoprotéine de 12 kD, inhibitrice de protéase, synthétisée de façon androgéno-dépendante dans la prostate et les vésicules séminales, de façon constitutive mais en niveaux beaucoup plus faibles dans le pancréas. Nous avons entrepris de caractériser in vivo chez la souris les mécanismes moléculaires responsables de la spécificité d'expression de ce gène. Les résultats que nous présentons concernent plus spécifiquement la délimitation d'une séquence minimale contenant le site d'initiation de la transcription et couvrant les positions de -143 à +1088 (numérotation murine). Cette séquence a été isolée à partir de clones TATA et …
Colloque
Le contrôle de l'expression génétique chez les eucaryotes est déterminé par l'interaction de facteurs de transcription avec des éléments "cis-acting" localisés dans la région promotrice des gènes. Le gène P12, déterminé par le produit d'un inhibiteur de protéine spécifique à la glande de la rate de Kazal, voit son expression stimulée par les glucocorticoïdes. Nous avons identifié un facteur de transcription hormone-indépendant et détectable dans les extraits nucléaires de la rate de rat. Ce facteur, nommé GC2, se lie à une séquence spécifique située en position -150 du gène P12.
Colloque
Le gène déterminant la synthèse de la GH chez le rat n'est exprimé que par le lobe antérieur de l'hypophyse. Sa production est maintenue silencieuse dans tous les autres tissus examinés. Cette répression tissu-spécifique dans les cellules d'origine non-hypophysaire est déterminée par l'élément Silencer. Nous avons caractérisé deux complexes liant aux séquences Silencers (SII et SIII), homologues entre elles et situées 3000 et 5000 paires de bases en 5' du gène GH. Par rétention en gel et formation d'un complexe stable, nous avons démontré que l'activité de liaison des protéines est spécifique aux séquences des Silencers SII et SIII. Le …
Colloque
La synthèse de l'hormone de croissance (GH) est régulée de façon tissu-spécifique, celle-ci étant produite par certaines cellules spécialisées provenant de la glande pituitaire. Nous avons démontré que la région de l'ADN comprise entre les positions -237 et -52 de l'élément 5' du promoteur minimal (-237 à +7) contient 2 séquences similaires (SII et S12) impliquées dans la spécificité d'expression tissulaire de cette hormone chez le rat (rGH). Ces séquences agissent en réprimant les niveaux d'expression d'un gène CAT sous contrôle de promoteur de rGH dans des cellules étrangères au pituitaire. Ces séquences, conférant les propriétés nécessaires à cette répression …
