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Colloque
Les D-hydantoinases microbiennes ont un haut potentiel dans la production industrielle des acides aminés par biocatalyse. Dans ce contexte, la recherche et l'isolement de nouveaux microorganismes producteurs de l'enzyme D-hydantoinase est nécessaire. Afin de détecter rapidement de tels organismes, une sonde moléculaire non radioactive a été construite et utilisée de façon à identifier des organismes possédant des gènes codant pour la D-hydantoinase. Un fragment d'ADN issu de Pseudomonas putida DSM 84 contenant le gène codant pour la D-hydantoinase a été cloné puis réduit davantage par des sous-clonages jusqu'à l'isolement d'un fragment de 1.5 kb. Celui-ci a été marqué et utilisé …
Colloque
Afin de répondre à une forte demande en acides aminés des industries alimentaires et pharmaceutiques, une méthode de criblage en culture continue pour sélectionner de nouveaux microorganismes producteurs de l'hydantoinase (enzyme impliquée dans la synthèse des acides aminés) a été mise au point. En se servant de Pseudomonas putida DSM 84 comme témoin positif de l'activité de l'hydantoinase en culture discontinue, la thymine fut identifiée comme inducteur de l'hydantoinase. Cette induction fut confirmée en culture continue. En appliquant cette technique, une autre souche de Pseudomonas putida productrice de l'hydantoinase a été sélectionnée à partir d'une population mixte de microorganismes cultivés …
Colloque
L'hydantoinase (EC 3.5.2.2) est une enzyme stéréospécifique hydrolysant les liaisons C-N des amides cycliques et conduisant à la formation de précurseurs des acides aminés. Elle est retrouvée chez les mammifères, les micro-organismes et les végétaux. Trois sources de légumineuses et les pois verts frais, les cosses de pois verts et un sous-produit tiré des pois secs ont été évalués pour leur activité hydantoinase. Les cosses de pois verts (EPV) en présence du substrat hydantoine évaluant l'activité. L'extraction a été réalisée à l'aide de sodium pH 9.5, 100 mM. Cette enzyme était active sur le substrat à des valeurs de pH …
Colloque
L'hydantoinase transforme certains substrats en précurseurs d'acides aminés. Des extraits semi-purifiés testés pour la production de N-carbamyl-beta-alanine (NCBA) ont révélé l'instabilité de l'enzyme. Une façon de pallier ce problème serait d'optimiser et de stabiliser l'activité de l'enzyme provenant de cellules entières de Pseudomonas putida. Celles-ci ont été soumises à divers facteurs tels que la température, la composition ionique du milieu, le pH et divers tampons. Les résultats ont montré que l'activité de l'enzyme était plus stable avec des cellules immobilisées à 30°C dans un tampon Tris-HCl pH 8.0, 1M contenant 10 mM de MgSO4 et 50 mM de FeSO4. Les …
Colloque
Les hydantoinases connues sont essentiellement produites par des bactéries aérobies et sont utilisées pour la production de précurseurs d'acides aminés. Une des objections à l'utilisation des hydantoinases de bactéries anaérobies pourrait être l'instabilité de l'enzyme due à la difficulté d'élaborer des systèmes d'anabolisme anaérobie. Pourtant, avec un système de culture tamponnées pré-réduites simples, nous arrivons à améliorer la stabilité et l'activité enzymatique des hydantoinases d'acides aminés tout en stabilisant bien l'enzyme sur des cycles de lyases s'élevant à 30 jours. Cette observation permet d'augmenter la production et la concentration d'acides aminés. Nous comparons la stabilité et l'activité enzymatique des hydantoinases …
Colloque
La production d'acides aminés via des étapes enzymatiques à partir de précurseurs dihydropyrimidines telles les hydantoïnes 5-monosubstituées constitue une alternative intéressante aux procédés classiques (fermentation). Les enzymes de type dihydropyrimidinase (I.B.C. 3.5.2.2) catalysent l'hydrolyse stéréospécifique de dérivés dihydropyrimidique pour donner le N-carbamyl aminoacide chiral correspondant; lequel peut être chimiquement ou enzymatiquement converti en acide aminé. Ces enzymes peuvent avoir une activité analogue sur les hydantoïnes. Au niveau microbien, elles sont surtout détectées chez les bactéries aérobies (Pseudomonas, Arthrobacter). Pour la première fois, une caractérisation partielle i.e. activité et stabilité aux températures et pHs, cinétique enzymatique et courbe de production de …
Colloque
Les consommateurs réclament des composantes alimentaires naturelles pour lesquelles l'agriculture traditionnelle ne peut suffire à la demande, d'où l'importance de développer des méthodes de production d'arômes naturels par voies biotechnologiques. Certaines souches de Pseudomonas fragi produisent un arôme de fraise lorsqu'elles croissent dans le lait. L'identification et la quantification des composés responsables de l'arôme ont été faites par concentration des volatils sur une phase adsorbante suivie d'une analyse par chromatographie en phase gazeuse. Nous avons mis en évidence la présence de quantités appréciables d'éthyl butyrate et d'éthyl hexanoate, deux composés identifiés par Reddy et al (1968) comme étant les principaux …
Colloque
La dihydropyrimidinase (EC 3.5.2.2) catalyse l'ouverture énantio et régiosélective de l'anneau de la dihydropyrimidine et de plusieurs hydantoïnes monosubstituées en position 5 pour donner le N-carbamyl-amino acide de chiralité correspondante. Cette enzyme, qui n'a pas encore été isolée chez les bactéries anaérobies, offre une voie alternative dans la synthèse enzymatique des acides aminés. Parmi 2800 souches bactériennes anaérobies isolées sur milieux sélectifs pré-réduits, vingt ont démontré une activité dihydropyrimidinasique. Une étude plus exhaustive de ces vingt souches a révélé qu'il s'agissait de bactéries anaérobies strictes et que des cinq souches les plus actives, quatre étaient gram positives et une gram …
