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Colloque
Depuis quelques années déjà, certaines protéines oncofœtales ont été identifiées à partir de tumeurs et sont utilisées comme marqueurs pour le diagnostic et pour suivre les patients sous traitement anticancéreux. Récemment, Tatariwov a identifié une préalbumine embryonnaire à partir de tumeurs d'origine mésodermique. Kalasnikov a démontré l'existence de deux préalbumines embryonnaires, EPA-I et EPA-II. Dans notre laboratoire, nous avons procédé à l'isolement de ces protéines à partir du liquide amniotique humain. Suite à un extrait acide, le matériel positif en EPA est successivement chromatographié sur DEAE cellulose, Sépharose Blue, DEAE Affi gel blue et DEAE Sépharose CL-6B. L'EPA-I a été …
Colloque
La préalbumine embryonnaire humaine (EPA), une glycoprotéine présente dans le liquide amniotique, le tissu foetal et différents tissus tumoraux a été purifiée et caractérisée à partir du liquide amniotique précoce et d'une mère décédée. Après une extraction de l'EPA le matériel a été séparé par ultrafiltration, chromatographie d'affinité sur Affi Gel Bleu et sur DEAE Affi Gel Bleu. Les dernières traces d'impuretés ont été éliminées en chromatographie par déplacement d'ampholytes sur échangeur d'anions. L'absence de contaminant sérique a été vérifiée par chromatographie en HPLC sur colonne TSK 3000, électrophorèse sur gel, immunoélectrophorèse et immunodiffusion. La préalbumine embryonnaire humaine (EPA-1) n'a …
Colloque
En chromatographie liquide à haute pression sur échangeur d'ions, les protéines ou peptides absorbés sont habituellement élués par un gradient de pH et/ou un gradient salin. Cependant, dans plusieurs cas, ces deux techniques d'élution ne permettent pas une résolution suffisante pour séparer certaines protéines possédant des propriétés physico-chimiques semblables. La chromatographie par déplacement d'ampholytes en HPLC permet d'augmenter cette résolution. Cette technique consiste en l'établissement d'un gradient de pH naturel (sans champ électrique) par la simple application sur échangeur d'ions d'une solution d'ampholytes de la gamme de pH désirée. L'utilisation de cette méthode en HPLC sur échangeur d'ions et en …
Colloque
La préalbumine embryonnaire humaine (EPA), une glycoprotéine présente dans le liquide amniotique, le tissu foetal et différents tissus tumoraux a été purifiée et caractérisée à partir du liquide amniotique précoce et d'une mère décédée. Après une extraction de l'EPA le matériel a été séparé par ultrafiltration, chromatographie d'affinité sur Affi Gel Bleu et sur DEAE Affi Gel Bleu. Les dernières traces d'impuretés ont été éliminées en chromatographie par déplacement d'ampholytes sur échangeur d'anions. L'absence de contaminant sérique a été vérifiée par chromatographie en HPLC sur colonne TSK 3000, électrophorèse sur gel, immunoélectrophorèse et immunodiffusion. La préalbumine embryonnaire humaine (EPA-1) n'a …
Colloque
Nous décrivons une méthode de dosage du rétinol (vitamine A) par chromatographie liquide à haute pression. Cette méthode ne nécessite que très peu de sérum (100 µl), le tout est traité à l'hexane pour en extraire le rétinol. L'acétate de rétinyle est utilisé comme étalon interne. La méthode est expérimentée au moyen de différents étalons, soit le rétinol, l'acétate de rétinyle, l'acide rétinoïque et le palmitate de rétinyle, afin d'en assurer la spécificité et la reproductibilité. L'extrait lipidique du sérum est élué sur une colonne d'octadécylsilice (ODS-618) par un mélange de méthanol:eau (95:5) préfiltré sur un filtre de 45µ. La …
Colloque
La gamma-glutamyl transpeptidase (CGT) est une enzyme membranaire dont le taux s'élève dans différentes pathologies. Son activité est fortement augmentée dans l'hépatostéatose (cancer du foie). Dans le cas de tumeurs rénales, quoique son activité totale des tumeurs soit augmentée, elle est masquée par la présence d'un isoenzyme de la CGT qui est aussi normal. La purification de la CGT de rein est obtenue à partir de rein. La CGT est extraite après homogénéisation des reins et solubilisation dans le Triton X-100. Après centrifugation, le surnageant est soumis à un mélange et débarrassé de l'albumine par passage de l'extrait sur une …
Colloque
La ferritine est une protéine de haut poids moléculaire dont le noyau central peut contenir jusqu'à 4000 atomes de fer par molécule. Cette protéine est produite sous plusieurs formes dépendant de l'origine tissulaire. La ferritine a été extraite de foie humain normal obtenu à l'autopsie, chauffée 10 min à 75°C, séparée sur membrane Diaflo XM-300 et Sephacryl S-300. Les protéines ont ensuite été absorbées sur DEAE-Affi Gel Blue et éluées à l'aide d'un gradient de NaCl. Le rendement de la méthode est de 32%. La ferritine a été trouvée pure par analyse sur gradient de polyacrylamide et ultracentrifugation analytique. On …
Colloque
L'emploi d'anticorps anti-protéines oncofoetales comme agents de transport de drogues antitumorales a été évalué in vitro sur des lignées cellulaires productrices de CEA ou d'AFP. A été utilisé, daunomycine, reliée de façon covalente aux anticorps spécifiques au marqueur visé. Une inhibition de croissance cellulaire supérieure est observée avec l'emploi du conjugué covalent, comparativement à celle entraînée par la dauno seule, les anticorps seuls ou par le mélange des deux agents, et ce, pour une concentration de drogue inférieure à 1 μg/ml de milieu de culture. Le conjugué présente un effet cytotoxique important dès les premières minutes de contact avec les …
Colloque
Cette chromatographie utilise une solution d'ampholytes pour l'élution de protéines absorbées sur un échangeur d'ions. L'élution de ferritine de foie humain normal absorbée sur la colonne (0,7 X 20 cm) avec une solution d'ampholytes 22 cm de gradient de pH linéaire dans le tampon est étudiée ici. Nos résultats montrent que quelque soit le pH initial de l'échangeur d'ions, l'élution avec une solution d'ampholytes 22 cm obtient un gradient de pH linéaire. Un résultat similaire est obtenu lors de l'élution avec une gradient d'ampholytes 0-6. Selon la nature des groupements ioniques de l'échangeur d'ions et le pH des ampholytes, ceux-ci …
Colloque
La daunomycine est un antimitotique souvent utilisé en thérapie anticancéreuse, mais son action est non sélective et très toxique pour les cellules normales à prolifération rapide. Une approche possible pour augmenter la spécificité cytotoxique de la drogue consiste à la lier à des anticorps spécifiques à la tumeur. Dans ce but, des complexes anti-alphafoetoprotéine (AFP) de souris et de daunomycine ont été préparés par conjugaison covalente à l'aide de la glutaraldéhyde. Le rapport de conjugué dans ces complexes est de deux moles de drogue par mole d'immunoglobuline. Par la mesure de l'inhibition de la synthèse cellulaire et de la formation …
