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Colloque
Les appareils à gels horizontaux permettent une séparation efficace et reproductible de molécules d'ADN de tailles ou de conformations différentes, à la condition qu'un contact étroit entre le gel et les électrodes soit établi. La plupart des matériaux employés jusqu'à maintenant pour établir ce contact électrique ont tendance à se désécher durant l'électrophorèse, ce qui provoque une chute importante de voltage entre les deux extrémités du gel et nuit à l'interprétation des résultats. Un tissu fait de fibres de rayonne entremêlées a été utilisé comme transporteur de courant pour la séparation de molécules d'ADN viral fragmentées par des désoxyribonucléases de …
Colloque
Les topoisomérases procaryotes ou eucaryotes, de types I et II, sont des enzymes qui modifient la conformation de l'ADN dans des conditions différentes. La topoisomérase de type I catalyse l'isomérisation de molécules d'ADN torsadées en molécules circulaires relâchées, alors que celle de type II effectue l'opération inverse en présence d'ATP. Nous avons découvert chez S. faecalis une topoisomérase de type I qui, contrairement aux enzymes bactériennes connues, fonctionne à haute force ionique (400 mM NaCl). Similaire en ce point aux topoisomérases eucaryotes, elle requiert toutefois des ions Mg++ (2-10 mM) pour fonctionner convenablement. Cette enzyme appartient donc à une catégorie …
Colloque
La transfection de cellules avec de l'ADN est une technique d'une importance capitale pour le clonage de gènes et l'étude de leur expression au niveau moléculaire. Cependant, l'aspect préservation des cellules a toujours été négligé dans ces expériences. En effet, la transfection est une infection permettant de conserver le maximum de cellules viables a donc été mise au point. Les cellules Véro (rien de singe) ont été utilisées comme indicateurs à cause de leur sensibilité relative au CaCl2. Nos résultats montrent que l'exposition du feuillet cellulaire à une solution de glycérol avant l'addition d'ADN SV40 précipité par le CaCl2 diminue …
Colloque
L'insertion d'un fragment d'ADN étranger dans le site Hind III du plasmide pAT153 inactive partiellement le gène tet, responsable de la résistance de Escherichia coli à la tétracycline. En présence de 80 μg/ml d'ampicilline et 4 μg/ml de tétracycline, les bactéries HB101 porteuses d'un plasmide recombinant forment sur agars complets, des colonies de taille inférieure à celles contenant le plasmide sauvage. Cette différence phénotypique importante nous a permis d'obtenir en quelques jours plusieurs centaines de plasmides dans lesquels des fragments Hind III de l'ADN du cytomégalovirus humain avaient été insérés. Dans les conditions actuelles, plus de 70% des petites colonies …
