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Colloque
Nous avons comparé la stimulation d'erreurs de lecture in vitro par la streptomycine et la néomycine. Les systèmes de synthèse utilisés étaient dirigés par le polyuracile et individualisé l'acide aminé non-codé par le message (isoleucine, sérine, tyrosine, phénylalanine) et les incorporeurs. La fidélité de l'enchaînement d'acides non correspondants est altérée. La néomycine n'augmente pas le taux d'erreurs de lecture, contrairement à la streptomycine, ce qui entraîne l'obtention d'un produit de synthèse contenant 1 à 2 erreurs de lecture. Nous avons précédemment montré que la streptomycine et la néomycine perturbent la fidélité de lecture du message en augmentant les erreurs de …
Colloque
Nous avons étudié l'activité de synthèse protéique des polyribosomes de hamsters atteints de cardiomyopathie héréditaire. Des polyribosomes ont été purifiés à partir de différents tissus de hamsters cardiomyopathiques (foie, muscle squelettique, muscle cardiaque). Un test caractérisé par leur activité de synthèse protéique dans un système acellulaire où les enzymes de synthèse des e-RNAs étaient fournis par un extrait de germe de blé. L'activité de synthèse était mesurée d'après l'incorporation de [14C] leucine dans une polypeptide que l'on précipite à l'acide trichloracétique. Nous avons observé une diminution de l'activité de synthèse des polyribosomes de hamsters cardiomyopathiques dans les différents types de …
Colloque
Des mutants bactériens résistants à la néomycine (100 mg/µl) ont été sélectionnés à partir d'E. coli KY1220 par traitement au méthanesulfonate d'éthyle (EMS) suivi d'un long délai phénotypique. Ces mutants ont été caractérisés in vivo : croissance sur différents milieux (succinate, malate...), réponse à divers antibiotiques (aminoglycosides, tétracyclines, chloramphénicol). Leurs ribosomes ont été isolés et caractérisés pour leur activité de synthèse in vitro en présence de divers antibiotiques, alors que des synthèses dirigées par des RNA messagers M2(+) et poly(U) ou naturels (RNA du phage MS2) et aussi par leur aptitude à engendrer des erreurs de lecture. L'ensemble des résultats …
Colloque
La dystrophie musculaire de Duchenne (DMD) est une maladie génétique résultant d'une mutation au niveau du chromosome X. Nous avons isolé des polyribosomes de fibroblastes en culture de porteurs et de patientes atteintes de la DMD et de porteuses de la maladie. Après broyage et homogénéisation, les cellules ont été centrifugées, les polyribosomes ont été isolés par centrifugation à travers un coussin de saccharose 1,5M. Un test caractéristique pour leur activité in vitro a été effectué. Les résultats obtenus sur les fractions solubles sont fournis par un test d'activité de bille. Les résultats obtenus montrent que chez les 7 patients …
Colloque
Nous avons étudié les changements de conformation du ribosome bactérien provoqués par la streptomycine (Sm) et la néomycine (Nm), à l'aide de sondes nucléaires: des marqueurs de protéines (la N- [14C]-éthylmaléimide, un analogue de spin et un marqueur fluorescent analogue à la N-éthylmaléimide) et un marqueur du RNA (le bromure d'éthidium). Nos résultats montrent que Sm et Nm modifient la structure du RNA et des protéines ribosomiques. La localisation des changements diffère suivant l'antibiotique étudié: Sm affecte principalement le RNA, tandis que Nm affecte surtout les protéines ribosomiques. La Sm déplace l'anticodon de l'ARNt en position A, ce qui empêche …
Colloque
Nous avons comparé la sensibilité à différents inhibiteurs de la synthèse protéique (émétine et pactamycine) de cellules transformées (SV-72) et non-transformées (3T3). Nos méthodes d'étude ont consisté à mesurer la synthèse protéique in vivo et in vitro d'après l'incorporation dans des protéines, de [14C] leucine. L'incorporation in vitro est évaluée dans un système où seules les polysomes provenant de cellules étudiées tandis que l'acceptor tRNA et les autres fournit par un extrait de foie de lapin. Nous avons observé que les cellules transformées SV-72 sont plus sensibles à l'émétine et à la pactamycine que les cellules 3T3. L'étude des inhibiteurs …
Colloque
Des ribosomes d'E.coli ont été marqués avec des marqueurs radioactifs ou fluorescents, ou des marqueurs de spin, dérivés de la N-éthylmaléimide. La néomycine induque que, en présence de néomycine (Nm), la structure du ribosome est déformée et que certaines protéines adoptent une structure plus déployée. Le marquage du RNA ribosomique avec du bromure d'éthidium indique également qu'en présence de Nm le RNA adopte une conformation plus déployée. En présence de néomycine, la structure provoquée par ce type de déformation du ribosome observée par Ne est analogue à celui qui a été observé avec la streptomycine (Sm), lors de travaux antérieurs …
Colloque
La fréquence d'obtention des mutants ribosomiques résistants à la streptomycine (Sm^r) est faible et le nombre de types "classiques" de mutants Sm^r est limité à 4. Toutefois, nous avons montré qu'il est possible d'accroître la fréquence et le nombre de types de mutants Sm^r par traitement avec un agent mutagène suivi d'un long délai phénotypique (7h). La fréquence de mutants varie proportionnellement à la concentration en agent mutagène lorsque le délai phénotypique est court (2.5h); les mutants Sm^r ainsi sélectionnés sont de type classique caractérisé par un changement dans la protéine ribosomique S12. Par contre, la fréquence de mutants varie …
Colloque
Un mutant de Escherichia coli K12Y20 fortement résistant à la streptomycine a été induit par traitement au méthane sulfonate d'éthyle. La protéine S12 de la sous-unité ribosomique 30S, qui est codée par le gène str et qui confère le phénotype de résistance vis-à-vis de la streptomycine (Sm) a été isolée à partir de la souche parente Sm-s et du mutant Sm-r. La comparaison de la composition en acides aminés de la protéine S12 de la souche Sm-s et du mutant Sm-r montre que des substitutions d'acides aminés ont accompagné la mutation. Des cartes peptidiques ont été préparées après digestion par …
Colloque
Différents groupes de chercheurs ont montré que des protéines de la sous-unité ribosomique 30S autre que la protéine codée par le gène str peuvent influencer la réponse de la bactérie à la streptomycine (Sm). C'est le cas de la protéine S12, codée par le gène ram. Un mutant de E. coli K12Y20 résistant à la streptomycine a été sélectionné après traitement au méthanesulfonate d'éthyle. Outre la protéine S12, la protéine S4, de ce mutant est également modifiée. Nous avons étudié les modifications de la protéine S4. L'analyse de la composition en acides aminés indique un nombre élevé de substitutions (sept …
